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昆虫RNA柱式提取亚博体育怎么样图片
产品货号:
BTN81220
中文名称:
昆虫RNA柱式提取亚博体育怎么样
英文名称:
Insect RNA column Extraction Kit
产品规格:
50次
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本亚博体育怎么样是专门用于从富含多糖、糖蛋白、粘蛋白的动物样品(尤其是昆虫样品)中提取总RNA的试剂。

亚博体育怎么样特点:
1. 操作简单快速,处理一个样品只需要约十分钟。
2. RNA纯度高,平均 OD260/280一般都在2.0左右,能够有效去除大多数昆虫中的多糖污染。
3.适用于各种昆虫组织,每100mg组织能提取到20-30μg 总RNA。
4. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA合成等实验。
5.一站式,提供RNase-free的样品收集管。

亚博体育怎么样组成:
成分规格
溶液A50ml
溶液B15ml
溶液C50ml
离心吸附柱50套
通用洗柱液50ml
RNA洗脱液10ml
说明书1份


储存条件:常温运输,4℃保存(RNA洗脱液最好4℃保存),有效期一年。

使用方法:
1. 将50-300mg昆虫组织放入10-15mL塑料离心管中,加入1mL溶液A,然后用匀浆器匀浆5-20秒。匀浆时会产生泡沫,但不影响提取效果。也可以使用液氮砚磨法破碎昆虫组织,砚磨完后加入1mL溶液A。
注意:溶解溶液A沉淀。溶液A在4℃放置后可能会产生沉淀,使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。
2. 将匀浆物或砚磨物转移至干净的1.5mL塑料离心管中(可以不必转移非液体的细胞碎片)。
3.在离心管中加入0.3mL的溶液B和0.2mL自备氯仿,在振荡器上振荡30秒混匀,此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
4.室温12000 rmp离心3~5分钟,两相间将有约5-10毫米厚的细胞破碎物。
5. 将上清液(约0.6mL)转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中,下层有机相和中间层含有DNA、蛋白质和其他杂质,避免触及或吸取。最好留下100μl上清液不取。
6. 加入等体积的溶液C,充分颠倒混匀。
7. 将一半的溶液转移到离心吸附柱中,12000 rmp室温离心半分钟,弃穿透液。
8. 将剩下的一半溶液转移到同一离心吸附柱中,12000 rmp室温离心半分钟,弃穿透液。
9. 加0.7mL通用洗柱液,室温12000 rmp离心半分钟,弃穿透液。
10. 加0.3mL通用洗柱液,室温12000 rmp离心半分钟,弃穿透液。此步可以省略。
11.室温12000 rmp离心半分钟。此步十分重要,否则残留的乙醇会影响RNA的使用。
12. 将离心吸附柱转移到RNase-free收集管中,加入50-100μl RNA洗脱液,室温放置1-2分钟。
13. 12000 rmp室温离心半分钟,离心管中溶液即为RNA样品,可以立即使用或存放于-80℃待用。
14. RNA完整性的电泳检测:如果需要做Northern杂交,强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳,因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques,28:414,2000)。注意:大部分昆虫的28S RNA被切割成两个小的片段,彼此用氢键相连,所以在甲醛变性胶中,没有28S带出现(文献见:Eva C. Winnebeck,Craig D. Millar and Guy R. Warman,Why does insect RNA look degraded? Journal of Insect Science: Vol. 10:1-7)
15. RNA产量产率测定:将5-10μl RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL),进而计算出RNA的产量(浓度X体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
16. RNA纯度测定:无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关),高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染,但一般不影响RT-PCR等反应。
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