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产品目录

通用型LAMP亚博体育怎么样图片
产品货号:
BTN100203
中文名称:
通用型LAMP亚博体育怎么样
英文名称:
Universal Loop-Mediated Isothermal Amplification Kit
产品规格:
50次
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本亚博体育怎么样可以用于LAMP等温扩增,LAMP即环介导等温扩增,是一种新颖的等温核酸扩增方法。它利用4条模板专一的特异引物和具有链置换能力的DNA聚合酶,在等温条件下(63℃左右)30-60分钟完成扩增(详细反应过程见本页面下方相关产品栏中的LAMP flash)。该技术在灵敏度、特异性和检测范围等指标上能媲美甚至优于PCR技术,同时还不需要模板的热变性、温度循环、电泳及紫外观察等过程,不依赖任何专门的仪器设备。目前已成功应用于人类及动植物、细菌、病毒、寄生虫、真菌等病原体的快速检测。

产品特点:
1.高特异性,由于同时使用4-6条特异引物,所以特异性比PCR更高。
2.高扩增效率,扩增效率可达到10E9-10E10,比PCR灵敏一个数量级,可检测到单拷贝的DNA分子。
3. 65℃左右等温扩增,不需要贵重的热循环仪。
4. 即开即用,包含了除引物和模板DNA外的所有成份,十分方便。
5. 肉眼检测扩增结果,不需要昂贵的电泳、荧光PCR等仪器。
6. 提供扩增对照,便于在遇到困难时分析原因。

亚博体育怎么样组成:
成分规格
LAMP Mix(2×)0.5ml
Bst DNA聚合酶(8U/μL)75μl
对照引物20μl
对照模板DNA5μl
25mM MgCl20.2ml
超纯水1ml
说明书1份


储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。

使用方法:
1.在冰上溶解除酶外的各种组份,混匀,稍离心。在反应管中加入以下组份:
成份样品管阴性对照
LAMP Mix(2×)10μl10μl
FIP引物终浓度0.8μM0.8μM
BIP引物终浓度0.8μM0.8μM
F3引物终浓度0.2μM0.2μM
B3引物终浓度0.2μM0.2μM
Loop F引物终浓度(可选项)0.4μM0.4μM
Loop B引物终浓度(可选项)0.4μM0.4μM
MgCl2(25mM)3μL3μL
模板DNA1-100ng不加
Bst DNA聚合酶(8U/μL)1.5μl1.5μl
补水到20μl20μl

注:如在反应管中加入本公司PCR级绿如蓝染料1μL(水则少加1μL),则可直接在荧光定量PCR仪中进行荧光定量检测。
2. 混匀,置于60-65℃保温30-120分钟。注意:如果不使用Loop引物,则最好保温2小时;如果使用Loop引物,则最好保温30分钟。
3. 80℃10分钟灭活Bst DNA聚合酶。
4.产物置于-20℃备用或立即用于下游检测。扩增产物可选下列方法之一检测:
a)琼脂糖凝胶电泳。取扩增产物5μl,1-2%的琼脂糖凝胶电泳,可见LAMP特征性电泳图谱;
b)向扩增产物中直接加入本公司PCR级绿如蓝染料(另售)1μL,混匀,稍离心。将反应管置于紫外透射仪或凝胶成像系统中,紫外灯下可见绿色荧光产生;
c)荧光定量检测。
5. 结果分析:
a)如果没有扩增,则需要用阳性对照进行扩增。本亚博体育怎么样提供5次阳性对照,反应按下表设置:
成份阴性对照管阳性对照管
LAMP Mix(2×)10μl10μl
对照引物混合物4.0μl4.0μl
对照模板DNA不加1μl
MgCl2(25mM)3μl3μl
Bst DNA聚合酶(8U/μL)1.5μl1.5μl
1.5μl0.5μl

混匀后,置于60℃保温120分钟,其余操作同上。注意:本对照引物中没有Loop引物,所以最好保温2小时。
b)如果阳性对照能够扩增出,则说明亚博体育怎么样没有问题,可能是模板或引物的问题。如果阳性对照没有扩增出条带,则是亚博体育怎么样的问题,请跟厂家联系。

注意事项:
1.引物设计对成功扩增十分关键。除用于SNP分型外,尽量以保守区设计引物。
2.引物至少包括F3/B3和FIP/BIP,加入环状引物F loop/B loop可以使反应速度大大提高。
3. 应优化引物序列、GC含量和尽量避免二级结构。
4.反应中各个引物的浓度及比例对扩增效果有一定的影响。
5. 建议先将所有引物混合在一起,配制成10×浓度以方便使用。
6. LAMP扩增具有特异性好、灵敏度高、时间快、不需要特殊仪器设备等优点。但太高的灵敏度使得其比普通PCR扩增更加容易污染导致假阳性。因此,必须高度重视扩增产物的污染。常规措施包括严格的实验分区、添加UNG和dUTP(可能导致反应效率下降)、使用荧光定量等不开盖检测方法。实验室一旦遭到污染,所有相关试剂必须全部更换,必要时还得更换实验室。
7. 要确证扩增的为目标基因,可以使用特定的限制性酶切和/或Southern杂交。
8. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床治疗、食品等用途。
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