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柱式动物线粒体DNA提取亚博体育怎么样(PCR级)图片
产品货号:
BTN80803
中文名称:
柱式动物线粒体DNA提取亚博体育怎么样(PCR级)
英文名称:
Animal mitochondrial DNA column extraction kit(PCR Grade)
产品规格:
50次
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
线粒体DNA(mtDNA)是进行分子进化研究和母性遗传研究的重要材料,但传统的两步式mtDNA提取方法是先温和裂解细胞,分离线粒体,然后再从线粒体中提取mtDNA。此方法中的温和裂解细胞的条件十分难以控制,需要针对不同组织材料单独进行优化。本亚博体育怎么样克服了上述缺点。

产品特点:
1. 不需要单独纯化线粒体,柱式法纯化,操作简单快捷。
2. 得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。
3. 每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克组织一般能得到3-5μg mtDNA。
4. 注意:本产品只适合于动物材料,不适合于植物材料,因为植物线粒体DNA一般都十分巨大,非常难提。

产品组成:
成分规格
溶液A13ml
溶液B13ml
溶液C18ml
离心吸附柱50套
通用洗柱液50ml
DNA洗脱液10ml
说明书1份


储存条件:常温运输,短期可以在室温放置;长期保存最好放4℃。

使用方法:

一:培养细胞预处理
1. 用自备的0.25%胰酶消化液处理约107个培养细胞,离心收集后弃上清。
2. 用PBS或TBS等缓冲液洗涤细胞两次,离心得到的细胞沉淀直接用于mtDNA提取。
二:组织细胞预处理
3. 用剪刀将1g新鲜的动物组织剪碎(芝麻大小最好),转移到1.5mL塑料离心管中,用于mtDNA提取。注意:最好不要使用冻存的动物组织,因为冻凝过程中形成的冰晶会将线粒体刺破,使其DNA释放出来被胞浆中的DNA酶降解,影响回收率。
三:血液预处理
4. 将3-5mL抗凝外周血静置30分钟或低速离心5分钟,取白细胞层。
5. 用自备PBS洗涤白细胞两次,得到的白细胞沉淀用于mtDNA提取。
四:mtDNA提取
5.在细胞沉淀或剪碎的组织中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的组织,不要等成块的组织溶解即可继续下步操作。
6. 加入250μL常温的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用),温和反复颠倒混匀10次。千万不要剧烈振荡。
7. 冰上放置6-8分钟。注意不要超过8分钟。
8. 加入350μL冰浴的溶液C,温和混匀4-6次,可见白色沉淀物产生,然后放冰上放置20-25分钟。
9.室温12000~15000g离心10分钟,小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大,有时候出现沉淀漂浮是正常现象,取上清时避开漂浮的沉淀即可。
10. 静置5分钟以让DNA与离心吸附柱充分结合,此步十分重要。
11.室温12000~15000g离心1分钟,弃收集管中的废液。
12. 加入500μL的通用洗柱液,室温12000~15000g离心1分钟,弃收集管中废液。
?注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要将盖拧紧存放,否则乙醇会挥发。
13. 重复上步1次。
14.室温12000~15000g离心1分钟,甩干残留液体。此步不能省略,否则残留乙醇会影响DNA的后续使用(如DNA上样时不能沉淀到加样孔中)。
15. 将离心吸附柱置于一个新的1.5mL塑料离心管中,加入30-50μL 65-80℃预热的DNA洗脱液,室温放置2分钟。常温的DNA洗脱液也可以用于洗脱,但产量稍微有所降低。
16.室温12000~15000g离心1分钟,离心管底溶液即mtDNA。
17. 由于本公司离心吸附柱结合DNA能力较强,如果再加30-50μL DNA洗脱液到离心吸附柱中,往往还能洗脱下很多mtDNA(相当于第一次洗脱的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液来洗脱。
18. 12000~15000g离心1分钟,离心管底溶液即线粒体DNA。每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克组织一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要浓缩,可以使用本公司的核酸浓缩剂。
19. 由于DNA机械断裂,电泳时DNA可能不呈现专一的带,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。
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